苦瓜子衣色素蛋白提取及抗氧化能力研究

对照液的吸光度；Ax为加入提取液后的吸光度。

2结果与分析

2.1最佳提取工艺条件的筛选

由表2可知，A1B3C3为最佳组合，即萃取温度为50 ℃、料液比为1〖DK〗∶40、萃取时间为30 min时，苦瓜子衣色素的提取率最高，为45.54%。此条件为苦瓜子衣色素提取的最佳工艺条件。

2.2双水相体系的制备

表3显示，当聚乙二醇4000的量固定时，一定范围内随着硫酸铵质量分数的增加，蛋白质的回收率逐渐上升；当硫酸铵质量分数大于35%时，蛋白质回

收率又逐渐下降。硫酸铵质量分数过高，不仅会破坏酶表面的水化层，使蛋白发生盐析，蛋白的萃取率下降；而且扰乱双水相系统，改变各相中成相物质的组成和相体积比[8]。综合考虑，确定硫酸铵的质量分数 35%为佳。

表4显示，当硫酸铵的量固定时，随着聚乙二醇4000质

量分数的增加，蛋白质回收率先增大后减小，并且在聚乙二醇4000质量分数为30%时，蛋白质的回收率达到最佳值。从分配理论

上解释，随着聚乙二醇4000量增加，黏度增大，阻止相间分子转移的能力增加，相界面张力亦增加。当聚乙二醇4000用量较低时，硫酸铵的盐析作用起主要作用，使蛋白质大部分分布在下相中[9]。

2.3苦瓜子衣色素蛋白的纯化

苦瓜子衣色素粗蛋白样品上DEAE阴离子交换柱，共得到2个洗脱峰。进一步纯化目的蛋白，将洗脱液继续上Sephadex G-100凝胶柱，共得到1个吸收峰（图1）。进行SDS-PAGE检测，如图2所示，电泳结果显示仅为1条带，说明其已经达到电泳纯，分子量为7410 kD。

2.4苦瓜子衣色素纯化蛋白的抗氧化作用

由表5可知，苦瓜子衣纯化蛋白和粗蛋白均具有抗氧化能力，其清除羟自由基的能力随着质量浓度的增加抗氧化性增强，但苦瓜子衣纯化蛋白在同等质量浓度下均稍弱于粗蛋白，原因可能是粗蛋白中含多种具抗氧化活性的蛋白共同产生作用。

3结论与讨论

该试验采用传统的乙酸乙酯法提取苦瓜子衣色素，确定苦瓜子衣色素提取的最佳条件。采用新兴的双水相法提取苦瓜子衣色素蛋白，为苦瓜子衣色素蛋白的提取开创新的途径。双水相法分离不同物质，系统中的聚乙二醇、硫酸铵的质量分数、pH、盐离子浓度等均不相同[10]，此法减少了蛋白的流失，且特异性强，有机试剂用量少，不必进行脱盐处理，简化了试验操作。

该试验发现，苦瓜子衣色素粗蛋白和纯化蛋白具有不同程度的抗氧化能力，苦瓜子衣色素蛋白粗提液中成分复杂，可能含有多种抗氧化能力的蛋白，因此苦瓜子衣色素粗蛋白的抗氧化活性大于纯化蛋白。苦瓜子衣色素蛋白是一种良好的、无毒害、纯天然的抗氧化物质，对其进行深入研究将为大规模生产抗氧化制剂奠定坚实基础。

参考文献

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