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[摘要] 目的 通过免疫组织化学SP法检测子宫内膜癌细胞中Smac、Bcl-2、Survivin 和 Bax的表达情况，寻找子宫内膜癌新的有效的检测分子，为子宫内膜癌的早期发现和诊断、监测复发和转移、判断疗效和预后提供指标。 方法 选取2011年2月～2013年9月来我院接受手术治疗的子宫内膜癌患者80例，同时选取52例正常子宫内膜组织和39例子宫内膜不典型增生组织。 结果 Smac、Bcl-2、Survivin和Bax在三种组织中阳性表达差异显著（P<0.05）。Smac与Bcl-2、Survivin在子宫内膜癌组织中阳性表达均呈负相关（rBcl-2=-0.398、rSurvivin=-0.335，P<0.05），而与Bax呈正相关（rBax=0.458，P<0.05）；而Bcl-2与Survivin阳性表达呈正相关（rSurvivin=0.581，P<0.05），而与Bax呈负相关（rBax=-0.477，P<0.05）；Bax与Survivin阳性表达呈负相关（r=-0.511，P<0.05）。 结论 对疑似子宫内膜癌患者进行Smac、Bcl-2、Survivin 和 Bax表达的检测以进行进一步确诊，提高临床确诊率，为今后的临床治疗方案提供新的治疗靶点和思路。
[关键词] 子宫内膜癌； 第二线粒体源性激活半胱天冬酶； B淋巴细胞瘤-2基因； 凋亡抑制基因； 促凋亡因子
[中图分类号] R737.33 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2016）23-0001-03
[Abstract] Objective To explore the expression of Smac， Bcl-2， Survivin in endometrial cancer cells by immunohistochemical SP method in patients with endometrial cancer， and to provide new indicators for early detection and diagnosis， monitoring of recurrence and metastasis， and determination of efficacy and prognosis of endometrial cancer. Methods 80 patients with endometrial cancer surgically treated in our hospital from February 2011 to September 2013 were selected， and another 52 cases of normal endometrial tissue， and 39 cases of atypical endometrial hyperplasia were also selected. Results There were significant differences in expression of Smac， Bcl-2， Survivin， and Bax in these three kinds of tissues（P<0.05）. The positive expression of Smac had a negative relation with Bcl-2 and Survivin in endometrial cancer tissue（rBcl-2= -0.398， rSurvivin=-0.335， P<0.05）， and had a positive relation with Bax （rBax=0.458， P<0.05）. The positive expression of Bcl-2 had a positive relation with Survivin （rSurvivin=0.581， P<0.05）， and had a negative relation with Bax（rBax=-0.477， P<0.05）. The positive expression of Bax had a negative relation with Survivin（r=-0.511， P<0.05）. Conclusion Detection of Smac， Bcl-2， Survivin， and Bax expression in patients suspected with endometrial cancer can further conform the diagnosis， improve the rate of definite diagnosis， and provide new treatment target and approach for future therapy.
[Key words] Endometrial cancer； Smac； Bcl-2； Survivin； Bax
近年来，子宫内膜癌的发病率和死亡率均呈上升趋势，且有年轻化的趋向。在我国，子宫内膜癌的发病率仅次于宫颈癌，在妇科恶性肿瘤中居第2位[1-3]。近年来研究发现[4-6]，子宫内膜癌的发生、发展可能与肿瘤细胞的凋亡受阻关系密切，第二线粒体源性激活半胱天冬酶（Second Mitochondria-derived Activator of Caspases，Smac）、B淋巴细胞瘤-2基因（B-cell lymphoma-2，Bcl-2）、凋亡抑制基因（Survivin）和促凋亡因子（Bax）可能通过不同机制参与了肿瘤细胞的凋亡过程。因此，本文旨在通过对子宫内膜癌患者手术后切除标本行免疫组织化学SP法检测以确定子宫内膜癌肿瘤细胞中Smac、Bcl-2、Survivin 和 Bax表达的临床价值，进一步分析它们之间的相互关系及其与临床病理指标之间的关系，以寻找子宫内膜癌新的有效的检测分子，为子宫内膜癌的早期发现和诊断、监测复发和转移、判断疗效和预后提供指标。
1 资料与方法
1.1一般资料
选取2011年2月～2013年9月来我院接受手术治疗的子宫内膜癌患者80例，年龄29～68岁，平均（52.5±10.2）岁，病程（1.3±0.2）年；同时选取52例接受病理活检的健康人正常子宫内膜组织，年龄27～69岁，平均（53.8±11.0）岁；另选取39例由于不正常阴道出血而入院的子宫内膜不典型增生组织，年龄27～72岁，平均（52.7±10.9）岁，病程（1.2±0.3）年。所有入选研究对象依据为活体病理检查确认后进行分组，排除其他系统重大疾病者及类似病症者、精神疾病者。三组入选研究对象在年龄、病程及相应基线资料方面差异无统计学意义（P>0.05）。
1.2方法
采用SP免疫组化染色，整个过程按试剂盒说明进行操作。现用现配3%透明质酸（Hyaluronan，HA），密封20 min，蒸馏水洗2次，每次5 min；再用磷酸缓冲盐溶液（Phosphate Buffer Saline，PBS）洗涤2次，持续5 min；山羊血清密封1 h；取出切片，继续用PBS缓冲液进行3次洗涤，共16 min；滴加即用型快捷免疫组化即用型快捷免疫组化（MaxVision）试剂，规格：18 mL（360片），湿盒中室温静置15 min；PBS洗涤3次，每次5 min；将其置于DAB中维持2～8 min，实时镜下观察。将石蜡融化后并除去杂质，并在石蜡中以1∶1加入邻二甲苯制成软蜡A和软蜡B，同时制备硬蜡A和硬蜡B（含有软蜡B），透明好的组织分别在软蜡A和软蜡B中浸泡30～40 min，在硬蜡A和硬蜡B中浸泡30 min。对待测样品用石蜡包埋，将样品与石蜡结合待凝固后应用石蜡切片机将待测组织切成4 μm厚度芯片，将组织芯片置于65℃恒温中5 h待测。
1.3观察指标
采用免疫组织化学技术（SP法）检测80例子宫内膜癌组织、39例子宫内膜不典型增生组织和52例正常子宫内膜组织中Smac、Bcl-2、Survivin 和 Bax的表达情况。Smac、Bcl-2、Survivin和Bax的阳性染色标准评定采用半定量法。
1.4统计学方法
采用SPSS 21.0统计学软件进行统计分析，其中相关性分析采用Spearman相关分析，计数资料采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 Smac、Bcl-2、Survivin 和 Bax在不同组织中的阳性表达
经统计学分析可知，Smac、Bcl-2、Survivin和Bax在不同组织中的阳性表达差异显著（P<0.05）。其中Smac和Bax在正常子宫组织中阳性表达率最高，Bcl-2以及Survivin在子宫内膜癌组织中阳性表达率最高。
2.2 Smac、Bcl-2、Survivin 和 Bax在子宫内膜癌组织中阳性表达的关联性分析
经统计学分析可知，Smac与Bcl-2、Survivin在子宫内膜癌组织中阳性表达均呈负相关（rBcl-2=-0.398、rSurvivin=-0.335，P<0.05），而与Bax呈正相关（rBax=0.458，P<0.05）；而Bcl-2与Survivin在子宫内膜癌组织中阳性表达呈正相关（rSurvivin=0.581，P<0.05），而与Bax呈负相关（rBax=-0.477，P<0.05）；Bax与Survivin在子宫内膜癌组织中阳性表达呈负相关（r=-0.511，P<0.05）。
3 讨论
近年来研究发现[7-16]，子宫内膜癌的发生、发展可能与肿瘤细胞的凋亡受阻关系密切，随着分子生物学的不断发展，从细胞凋亡的角度深入探讨子宫内膜癌的发生发展已备受人们的关注。其中Smac、Bcl-2、Survivin 和 Bax可能通过不同的机制参与了肿瘤细胞的凋亡过程。
Smac是存在于线粒体内的能够调节细胞凋亡的一类蛋白质，本文中Smac在子宫内膜癌组织中阳性表达率低于子宫内膜不典型增生组织中的阳性表达，说明Smac在肿瘤组织中表达较低，可能是由于其他相关因子对Smac产生的拮抗作用，从而抑制Smac产生并发挥作用，导致肿瘤细胞无法正常凋亡实现无限增殖，Bax与Smac呈正相关，说明二者属于同一类因子。Smac高表达可以使让肿瘤细胞更敏感地接受凋亡刺激，促进肿瘤细胞的凋亡，提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感程度，而Smac的低表达则有可能阻止肿瘤细胞的凋亡。Smac通过逆转凋亡抑制蛋白（IAPs），特别是X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）而实现促进凋亡，其与IAPs结合，使其丢失能够抑制半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶的能力，从而促进凋亡。许多因素诱导肿瘤细胞凋亡的同时伴有Bax表达升高，说明Bax高表达与肿瘤细胞凋亡密切相关，转染Bax到肿瘤细胞中能促进许多肿瘤细胞的凋亡。Bax与Bcl-2属于同源性蛋白，Bax能够通过过表达而抑制Bcl-2的作用，促进细胞凋亡。相反Bcl-2能够抵抗凋亡，其能够增强DNA的抵抗损伤能力，抑制DNA损伤分子传感器（p53），从而抑制凋亡。研究表明[17-19]，Bcl-2在乳腺癌、结肠癌、肝癌中的表达情况，发现Bcl-2的水平增高，Bcl-2在神经母细胞瘤、鼻咽癌、前列腺癌、膀胱癌、肺癌、胃癌等许多肿瘤中的表达也增强，提示Bcl-2在肿瘤细胞中的高表达可能抑制细胞凋亡而延长细胞存活时间。本次研究中，子宫内膜癌组织中Bcl-2阳性表达水平最高，且与Smac呈负相关，且相关性较强，说明Bcl-2可能是抑制Smac表达的因素之一。有研究表明[20]，Survivin几乎在所有被检测过的肿瘤组织中，如胃癌、结肠癌、胰腺癌、肺癌、前列腺癌等均有不同程度的表达，阳性率为30%～100%，且Survivin的表达与多种肿瘤的生物学特性和（或）疾病分期有关。本研究发现，Survivin在子宫内膜癌组织中也呈高表达，且与Bcl-2呈正相关，与Smac呈负相关，因此笔者推测，Survivin也可能是抑制Smac表达的一类因子。
综上所述，对疑似子宫内膜癌患者进行Smac、Bcl-2、Survivin 和 Bax表达的检测以进行进一步确诊，从而提高临床确诊率，为今后的临床治疗方案提供新的治疗靶点和思路。
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（收稿日期：2016-04-21）