摘 要 为探讨真菌诱导子与龙眼胚性愈伤组织中类黄酮、类胡萝卜素和单宁含量的相关性，以龙眼胚性愈伤组织细胞为材料，研究真菌诱导子种类、浓度及处理天数对龙眼愈伤组织细胞中类黄酮、类胡萝卜素和单宁含量的影响。结果表明：在固体培养基中加入100 mg/L拟茎点霉菌诱导子培养35 d时，最有利于类黄酮含量的积累，含量高达8.58 mg/g；拟茎点霉菌诱导子浓度为50 mg/L时培养35 d，最有利于类胡萝卜素含量的积累，其含量为36.83 μg/g；胶孢镰刀菌诱导子浓度为50 mg/L时的培养基中培养35 d，最有利于单宁含量的积累，其含量为10.50 mg/g。液体悬浮培养条件下，胶孢镰刀菌诱导子浓度为400 mg/L的培养基中培养7 d，最有利于类黄酮含量的积累，其含量为6.29 mg/g；尖孢镰刀菌诱导子浓度为200 mg/L的培养基中培养7 d，最有利于类胡萝卜素含量的积累，其含量为49.21 μg/g；胶孢镰刀菌诱导子浓度为400 mg/L的培养基中培养7 d，最有利于单宁含量的积累，其含量为13.15 mg/g。本研究为将来龙眼胚性愈伤组织细胞工厂化生产类黄酮、类胡萝卜素和单宁等次生代谢物质奠定理论基础并提供技术指导。
关键词 龙眼；胚性愈伤组织；真菌诱导子；类黄酮；类胡萝卜素；单宁
中图分类号 S667.2 文献标识码 A
Abstract To study the correlation between fungi elicitors and flavonoids， carotenoids and tannins in the embryogenic calli of longan， the embryogenic calli were used as the materials to investigate the effects of different kinds of fungi elicitors for the contents of flavonoids， carotenoids and tannin in callus cells. The results showed that under the condition of solid culture， the flavonoid content was the highest （8.58 mg/g） under the treatment of 100 mg/L Phomopsis longanae Chi for 35 d， and the carotenoid content was the highest （36.83 μg/g） under 50 mg/L P. longanae Chi treatment. For tannin， however， the content was the highest （10.50 mg/g） under Fusarium subglutinans Wollenw. et Reinkin treatment for 35d. Under liquid culture， the flavonoid content was the highest （6.29 mg/g） under the treatment of 400 mg/L F. subglutinans Wollenw. et Reinkin treatment for 7 d， the carotenoid content was the highest （49.21 μg/g） under the treatment of 200 mg/L F. Oxysporum for 7 d， and the tannin content was the highest （13.15 mg/g） under 400 mg/L F. subglutinans Wollenw. et Reinkin treatment for 7 d. The above results could provide a scientific basis and technical support for studying the metabolic mechanism of flavonoids， carotenoids and alkaloids.
Keywords Dimocarpus longan Lour； embryogenic calli； fungal elicitors； flavonoids； carotenoids； tannins
DOI 10.3969/j.issn.1000-2561.2018.09.015
龍眼（Dimocarpus longan Lour.）属于无患子科龙眼属，是我国著名的热带亚热带特色水果之一，富含多种次生代谢产物，素有“南方人参”美誉，是国家卫生部公布的法定的药用和食用两用的植物。龙眼中含有类黄酮、类胡萝卜素、单宁等多种次生物质[1-2]，具有很高的营养价值和药用功能[3-4]。类黄酮是一大类重要的次生代谢产物，具有多种生物功能，包括药用价值和保健功能，类黄酮生物合成研究已经成为植物次生代谢基因工程、代谢工程的主要目标[5]；类胡萝卜素是目前国际上开发和应用最广泛的天然色素之一，可作为食品、化妆品的着色剂被广泛应用，而且具有丰富的营养价值[6]，预防和减缓癌症的发展[7]；单宁也是具有抗氧化、抗癌等药用价值和保健功能[8]，具有广阔的市场前景。
根据植物细胞全能性理论，利用愈伤组织细胞可生产植物次生代谢产物。通过组培的方式能够大大缩短生产周期，人为调控环境，不受季节等因素影响，实现周年生产，而且不会破坏生态资源。植物体中次生代谢产物的积累受到多种因素影响，诱导或者提高植物体内次生代谢产物产量具有重要的应用前景。研究人员通过物理手段（如pH、温度等）和化学因素（如激素、诱导子等）提高生物体内代谢产物产量。尤其近几年发现真菌诱导子能引起植物细胞生长及影响细胞产生代谢物质含量的积累[9]。真菌诱导子能使植物产生过敏反应，并通过诱导植物积累特定的次生代谢产物来提高防御抗病能力[10]。在青钱柳（Cyclocarya paliurus）[11]、雷公藤（Tripterygium wilfordii Hook. f.）[12]、南方红豆杉（Taxus chinesis var. mairei）[13]、北柴胡（Bupleurum chinense DC.）[14]等悬浮细胞培养中添加真菌诱导子可大幅度提高细胞中的有效成分含量。在龙眼果肉中可分离获得龙眼拟茎点霉、镰刀菌和炭疽菌。添加一定的龙眼拟茎点霉、尖孢镰刀菌和胶孢镰刀菌，可影响龙眼胚性愈伤组织中影响多糖[15]和类黄酮含量[16]，但贺梦真等[16]只是进行了低浓度真菌诱导子诱导龙眼胚性愈伤组织细胞中类黄酮含量影响，较高浓度的真菌诱导子对龙眼胚性愈伤组织细胞中类黄酮含量影响效果还明确。因此，为探讨真菌诱导子与龙眼胚性愈伤组织中类黄酮、类胡萝卜素和单宁含量的相关性，本研究以龙眼胚性愈伤组织为材料，研究真菌诱导子对龙眼胚性愈伤组织细胞中类黄酮、类胡萝卜素和单宁含量的影响，为将来龙眼胚性愈伤组织细胞工厂化生产类黄酮、类胡萝卜素和单宁等次生代谢物质奠定理论基础并提供技术指导。