北虫草在鸡蛋内培养与制备研究

对照组鸡蛋不接种菌种，每组30枚鸡蛋。

1.3.6  培养  参考北虫草对生长环境的要求[13，14]，鸡蛋尿囊腔或卵黄囊腔内接种前3 d在20 ℃、湿度60%的恒温培养箱光照环境下培养，后3 d在23 ℃、湿度70%恒温培养箱内暗环境下培养。

1.3.7  喷雾干燥  于鸡蛋气室处破壳剥离蛋壳，在培养6、12、18、24日龄时，各取样品50 mL，加入超纯水、粉碎均质后采用4层纱布过滤，根据前期试验优化的工艺标准：进风温度150 ℃、进样量300 mL/h、空氣流量600 L/h、干燥剂比例4%进行喷雾干燥[15-17]、称重，观察试验结果。

1.4  数据处理

试验数据采用SPSS 24.0进行单因素方差分析，各组间数据的平均值采用邓氏多重比较进行差异显著性检验，测定结果以“平均值±标准误”表示，P<0.05表示差异显著。

2  结果与分析

2.1  北虫草菌种接种剂量对蛋虫草粉质量的影响

低、中剂量组喷雾干燥的蛋虫草粉质量比对照组增20.75%、34.95%，差异显著（P<0.05）;高剂量组喷雾干燥的蛋虫草粉质量比对照组增加5.23%，差异不显著（P>0.05）。中剂量组比低剂量组增加11.76%，差异极显著（P<0.01）。高剂量组比对照组增加5.23%，差异不显著（P>0.05），比低剂量组减少14.74%，差异显著（P<0.05），比中剂量组减少28.24%，差异显著（P<0.05）（表1）。

2.2  鸡蛋接种部位对蛋虫草粉质量的影响

尿囊腔、卵黄囊腔喷雾干燥的蛋虫草粉质量比对照组增加34.76%、15.70%，差异显著（P<0.05）。卵黄囊腔比尿囊腔喷雾干燥的蛋虫草粉质量减少16.47%，差异显著（P<0.05）（表2）。

2.3  接种培养时间对蛋虫草粉质量的影响

6日龄喷雾干燥的蛋虫草粉质量比对照组增加8.03%，差异不显著（P>0.05）。12日龄喷雾干燥的蛋虫草粉质量比对照组增加11.34%，差异显著（P<0.05），比6日龄增加3.07%，差异显著（P<0.05）。18日龄喷雾干燥的蛋虫草粉质量比对照组增加23.21%，差异显著（P<0.05）;比6日龄增加14.05%，差异显著（P<0.05）;比12日龄增加10.66%，差异显著（P<0.05）。24日龄喷雾干燥的蛋虫草粉质量比对照组增加3.49%，差异不显著（P>0.05）;比6日龄减少4.38%，差异显著（P<0.05）;比12日龄减少7.59%，差异显著（P>0.05）;比18日龄减少19.06%，差异显著（P<0.05）（表3）。

3  讨论

3.1  接种剂量对蛋虫草发酵培养的影响

王蓉等[18]研究人工培养北虫草的接种菌种量为2.5～5.0 mL，但在鸡蛋内接种北虫草菌种的研究目前还未见报道。本研究结果表明，在鸡蛋内接种低剂量北虫草菌种，蛋壳膜增厚，鸡蛋内菌丝体生长发育良好，蛋虫草粉质量比普通鸡蛋明显增加，成功培育出蛋虫草，鸡蛋内的氮源、碳源能满足北虫草菌种的生长发育，突破真菌微生物在液体、固体培养基的生长模式。尤其接种中剂量北虫草菌种时，菌丝和蛋壳膜形成一体，菌丝体比低剂量北虫草菌种生长发育更好，蛋虫草粉质量极显著增加，证明鸡蛋内的营养能满足一定剂量菌种的正常生长发育。但当接种剂量过大时，蛋壳膜表现不明显，菌丝体生长发育受阻，蛋虫草粉质量比低剂量、中剂量明显减少，说明鸡蛋内的营养物质数量有限，不能满足足量的菌种生长发育，以接种中剂量时（0.3 mL）生长发育良好（表4、图1、图2）。

3.2  接种部位对蛋虫草发酵培养的影响

接种部位对蛋虫草发酵培养的影响结果和方华舟等[19]研究一致，在北虫草菌种培养中加鸡蛋为外源氮源效果良好，试验和对照组鸡蛋相比较，无论接种在尿囊腔或者卵黄囊腔内，菌丝体在蛋壳膜上生长，蛋壳膜逐渐增厚，蛋壳内环境发生不同程度的改变，北虫草菌种均能生长发育，但以接种在尿囊腔内的菌丝体变化明显，喷雾干燥的蛋虫草粉质量增加显著（表4、图3和图4）。

3.3  培养日龄对蛋虫草发酵培养的影响

通过观察在鸡蛋内接种3日龄后，北虫草菌丝体开始生长发育，蛋壳膜和菌丝膜形成一體、蛋清营养物质吸收稀薄如水样、蛋黄颜色的改变以及喷雾干燥蛋虫草粉重量等综合比较，在试验前生长发育不明显，到12日龄生长发育明显，尤其12～18日龄时生长发育良好。但随着日龄的增加，鸡蛋内的营养物质被菌种消耗殆尽，24日龄和对照组、6日龄、12日龄之间差异不明显，应该是菌丝体逐渐出现自溶现象，与张杨等[20]研究关于北虫草接种时间对培养基的要求基本一致（表4、图5和图6）。

4  结论

北虫草天然资源数量很少，再加上大量采挖已日渐枯竭，传统人工培养基以大米、小麦、高粱、蚕蛹粉等为主，各营养成分有限，对培养条件要求苛刻、工艺复杂、周期长，而鸡蛋中含有丰富的蛋白质、脂肪、碳水化合物，能满足北虫草菌的营养需求，使之开发成具备多种营养的单一培养基质，接种后培养条件简单、周期短、方法简便，同时我国产蛋量大、价廉易得，因此将北虫草菌接种在鸡蛋内培养适合工业化批量生产。

通过试验将北虫草菌种接种在无公害鸡蛋内，以在尿囊腔内接种0.3 mL培养18日龄时，菌丝体变化明显、蛋壳膜和菌丝膜形成一体、蛋清营养物质吸收稀薄如水样，喷雾干燥蛋虫草粉质量增加显著，为北虫草培养新模式提供技术依据和理论基础，为研制北虫草提供新的思路和方法，为新型免疫增强剂的开发提供更多来源。

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