皇竹草急性毒性实验研究

对照组、皇竹草水煎液组、粉末组，每组10只，禁食不禁水12h，分别以生理盐水、皇竹草水煎液、皇竹草粉末甘油混悬液灌胃，单次灌胃最大容积为0.3ml/10g，1天灌胃3次，只灌胃一天，之后连续观察7d。记录期间小鼠死亡数和动物一般活动情况，若死亡数≥30%，则测定小鼠口服半数致死量（median lethal dose LD50），若不足以引起死亡，则测定动物最大耐受量（maximum tolerated dose MTD）。

2.2 半数致死量（LD50）的测定[9]

按照改良寇氏法，测定口服LD50。取小鼠120只，给水禁食12h，随机数字表法将动物分成12组，皇竹草水煎液、皇竹草粉末由最大浓度等倍稀释成不同等级浓度灌胃各6组，即皇竹草水煎液：10.8、5.4、2.7、1.35、0.68、0.34g/ml浓度，皇竹草粉末：120、60、30、15、7.5、3.75mg/ml浓度各一组，按0.3ml/10g体重灌胃，一天三次，连续观察7天，分别记录动物毒性反应和组内死亡情况，及其中毒发生时间、持续时间、中毒症状、恢复期等，计算LD50的可信区间；对死亡动物按规定进行解剖尸检，记录病情变化情况，肉眼不能辨别则进行病理切片检查。

2.3 最大耐受量（MTD）的测定[9]

取体重18-22g昆明种小鼠30只，随机数字表法将动物分为对照组、水煎液组、粉末组，每组各10只。禁食不禁水12h后，分别以生理盐水、皇竹草水煎液、皇竹草粉末甘油混悬液灌胃，单次灌胃最大容积为0.3ml/10g，1天灌胃3次，之后7d 内密切观察并记录小鼠精神、活动、饮食、大小便等生理情况及动物死亡数。

若有小鼠死亡，则将死亡小鼠解剖，肉眼观察心、肝、脾、肺、肾、脑、胃、小肠等脏器的改变。观察期结束后，将每组存活的小鼠处死进行解剖，同样对上述主要脏器大体病理变化进行肉眼观察。

2.4 皇竹草水煎液对小鼠体重增长的影响

最大耐受量（MTD）测定之后，以1/3MTD的剂量喂养小鼠一周，观察皇竹草水煎液对小鼠体重增长的影响。取体重18-22g小鼠20只，随机数字表法将动物机分为对照组、试验组，每组10只。对照组给予20%的淀粉糊灌胃，试验组给予皇竹草水煎液（3.6g/ml）灌胃，灌胃容积0.2ml/10g体重，每天2次，连续一周，实验期间正常喂养，观察并记录一般情况。称量给药前后各小鼠的体重，计算每只小鼠一周内的体重增加值，比较两组小鼠平均体重增加百分率。

体重增加百分率=（给药后体重-给药前体重）/给药前体重*100%.

2.5 数据统计使用excel软件，T检验比较组间差异。

3 实验结果

3.1预实验与半数致量（LD50）的测定

小鼠一天多次口服最大灌胃量皇竹草水煎液、粉末，7天内均无死亡发生，故两组口服LD50均未测出。

3.2最大耐受量（MTD）

测得皇竹草水煎液的MTD为：10.8×3×30=972.0g/kg/d、粉末为：0.12×3×30=10.8g/kg/d。两组动物给药0.5--1h后，大多出现自主活动减少、静卧不动、闭目、反应迟钝，2h后多数小鼠恢复正常。另个别小鼠有活跃、兴奋的表现，但6h后亦逐步恢复正常活动。24h后全部小鼠活动恢复正常。整个过程中未观察到惊厥、抽搐、瞳孔改变、眼球突出等异常情况。体重、食欲、活动、大小便等均未受影响。7天内小鼠全部存活，7d后处死动物并解剖，肉眼观察心、肝、脾、肺、肾等主要脏器，外观未见异常改变。

3.3皇竹草水煎液对小鼠体重增长的影响。实验期间，两组小鼠一般状况良好，未观察到惊厥、抽搐、大小便改变等任何异常表现。小鼠体重变化情况见表1。

表1 皇竹草水煎液对小鼠体重增长的影响（n=10）

注：与对照组比较 *P<0.05

表1结果显示，皇竹草水煎液灌胃一周，与给同体积淀粉液比较，对照组小鼠平均体重增加值及体重增加的百分率虽略高于给药组，但二者间差异无统计学意义。

4 讨论

小鼠急性毒性试验表明，本实验所使用的皇竹草毒性小安全范围广。小鼠口服皇竹草水煎剂的MTD为972g/kg/d，相当于一只20g小鼠一天食用19.5g（正常成年小鼠每天摄食量4--6g）。转换成人的剂量，亦相当于70kg成人一天摄食皇竹草7.6kg。小鼠皇竹草粉末的MTD为10.8g/kg/d，相当于一只20g小鼠一天食用2.2g（约占正常成年小鼠每天摄食量的50%），如果转换成人的剂量，亦相当于70kg成人一天摄食皇竹草干粉末0.85kg。由于动物喂饲的是全草，而不是水煎剂，所以皇竹草粉末的MTD更值得参考。如果转换成牛的剂量，亦相当于750kg牛一天摄食皇竹草干粉末2.125kg。再有，皇竹草鲜草的含水量80--85%，1kg干草粉末相当于7kg的鲜草，相当于一头750kg牛一天可以摄食鲜皇竹草15 kg。由此可见，皇竹草作为作为的饲草使用是较为安全的。通过1周的给药观察，小鼠体重均有增加，而未出现明显不良反应，结果亦验证了皇竹草的安全性，为今后更好地综合利用皇竹草应用于畜牧养殖业，建议进一步开展对其化学、营养、安全等方面的深化研究。

参考文献：

[1] 赵友华，陆云华，陈 武等： 皇竹草综合开发利用研究[J].宜春学院学报，2015，37（9）：89-91.

[2] 丁翠华.皇竹草特性及综合开发利用[J].现代化农业，2008，（12）：33-34.

[3] 姜琼，谢妤，赵友华.宜春引种皇竹草的营养成分和无机元素的实验测定与评价[J].宜春学院学报， 2014，36（6）：112-114.

[4] Ander so n W F，Dien B S，Brando n S K，et al. Assessment of bermudagrass and bunch grasses as feedstock for conversion to ethanol[J].Applied Biochemistry and Biotechnology，2008，145（1）：13-21.

[5] 于凌云，刘邦辉，王广军.投喂皇竹草和生物絮团草鱼稚鱼生长性能对比及营养成分评价[J].中国农学通报，2014，30（35）：132-138.

[6] 邵智骅，鲁进学，江喜春.皇竹草栽培及其饲喂肉羊综合利用技术[J].安徽农学通报，2011，17 （7）： 165-166.

[7] 项延润.皇竹草替代部分精料喂猪的效果试验[J].浙江畜牧兽医，2012，（3）：21-22.

[8] 胡民强，胡敏华.日粮中皇竹草粉含量对马岗鹅屠宰性能及肉质的影响[J].黑龙江畜牧兽医，2012，（6）：71-72.

[9] 陈奇.中药药理研究方法学（第三版）[M].北京，人民卫生出版社，2011：122-124.

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