【摘要】 目的 探讨肾型谷氨酰胺酶（GLS1）在小儿鼻咽癌中的临床意义。方法 66例原发性鼻咽癌患儿， 采用免疫组化法检测肿瘤组织中GLS1的表达， 分析其表达情况与小儿鼻咽癌患儿的各临床病理特征之间的关系及预后。结果 GLS1表达与鼻咽癌的TNM分期密切相关（χ2=7.547， P<0.05）；GLS1高表达组患儿的总体生存率和无病生存率均明显低于GLS1低表达患儿（P<0.05）。结论 GLS1的高表达在小儿鼻咽癌的发生发展中起到重要作用， 且与患儿的预后密切相关。
【关键词】 肾型谷氨酰胺酶；鼻咽癌；预后；小儿
DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2018.08.020
肿瘤细胞代谢具有特异性， 表现为对谷氨酰胺的明显依赖， 即“噬谷氨酰胺性”。谷氨酰胺酶（GA）是谷氨酰胺代谢过程中的关键酶， 在调节细胞代谢中起着关键作用[1]。在人体内存在两种GA， 即GLS1和谷氨酰胺酶2型（GLS2）。GLS1在各组织器官普遍存在， 而GLS2仅在肝脏中表达；并且GLS1已经被证实在多种恶性肿瘤中表达上调[2]。因此， GLS1很有可能是多种肿瘤相关的共同蛋白。本文主要探讨GLS1与鼻咽癌患儿的临床病理特征和预后之间的关系。现报告如下。
1 资料与方法
1. 1 一般资料 收集本院耳鼻咽喉科2014年5月～2017年8月收治的66例原发性鼻咽癌患儿， 行鼻咽癌切除且经术后病理诊断为原发性小儿鼻咽癌的标本70例（失访4例）。年龄5～15岁， 平均年龄（8.5±3.2）岁。所有患儿手术前均未接受放、化疗等抗肿瘤治疗。病理学分级根据Edmondson方法， TNM临床分期按照2010年国际抗癌联盟（UICC）制定标准。
1. 2 主要试剂 谷氨酰胺酶抑制剂968（美国Sigma公司）、兔单克隆抗体GLS1（美国Epitomics公司）、通用型免疫组化试剂盒（中国中杉金桥公司）、DAB显色试剂盒（中国中杉金桥公司）。
1. 3 免疫组织化学检测 GLS1检测采用免疫组织化学SP两步法， 二甲苯、酒精梯度脱腊， 高温高压热修复抗原。3%过氧化氢灭活内源性过氧化物酶， 加入一抗兔单克隆抗体， 4℃过夜。通用型二抗37 ℃孵育30 min， 然后DBA和苏木精染色。
1. 4 免疫组织化学染色结果評价 组织切片由病理科医生盲法阅片。其评分标准基于染色的强度和比例。染色强度评分如下：0分（阴性）， 1分（弱）， 2分（中）， 3分（强）；染色比例评分如下：1分（≤5%）， 2分（5%～50%）， 3分（≥50%）。综合评分为强度和比例分数的乘积。<5分为低表达， >5分为高表达。
1. 5 统计学方法 采用SPSS17.0统计学软件对数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示， 采用t检验；计数资料以率（%）表示， 采用χ2检验。生存分析采用Kaplan-Meier曲线， 生存预后影响因素采用单因素COX和多因素COX回归模型进行分析。P<0.05表示差异具有统计学意义。
2 结果
2. 1 GLS1在鼻咽癌中的表达及其与临床病理特征的关系
GLS1在鼻咽癌中的表达见图1。GLS1表达与TNM分期具有相关性（χ2=7.273， P<0.01）， 与性别、年龄、甲胎蛋白等其他指标无关。
2. 2 GLS1表达与鼻咽癌患儿预后的关系 总体生存率Kaplan-Meier曲线显示两组患儿的总体生存率差异具有统计学意义（log-rank 检验χ2=12.646， P<0.05）， GLS1高表达总体生存率低于GLS1低表达患儿；无病生存率Kaplan-Meier曲线显示两组患儿的无病生存率差异具有统计学意义（log-rank 检验χ2=11.2， P<0.01）， GLS1高表达患儿无病生存率低于GLS1低表达患儿（P<0.05）。
2. 3 Cox风险回归模型分析 对GLS1及相关临床病理特征进行单因素分析显示肿瘤分化、TNM分期和GLS1表达是影响鼻咽癌患儿总体生存率的危险因素；将三者纳入多因素回归模型， 结果显示肿瘤分化、TNM分期和GLS1表达是影响患儿总体生存的独立危险因素。
3 讨论
鼻咽癌是世界上常见的恶性肿瘤之一， 尤其多见于我国南方地区， 目前， 每10万人中发病人口可高达50例。近20年来， 鼻咽癌的发病率及死亡率正逐年上升， 有关流行病学调查显示， 仅在2008年全球新发病例已达至8万余例， 死亡率达61.1%。尽管近年诊断及治疗手段发展迅速， 鼻咽癌术后5年生存率仍然较低。由于鼻咽癌的发生、发展、侵袭转移是一个多步骤、多因素参与的复杂过程， 因此影响其上述过程和预后的因素尚未完全明确。研究发现， 代谢在肿瘤的增殖、进展、转移等过程起到举足轻重的作用[3]。肿瘤代谢表现为对谷氨酰胺的明显依赖， 由于对谷氨酰胺的大量消耗， 有学者将其称之为“氮陷阱”[4]。而GLS1是其代谢过程中的关键酶， 本文即研究了GLS1对小儿鼻咽癌患儿的预后。
GLS1已经被证明在多种肿瘤中表达上调， 例如乳腺癌、肺癌、前列腺癌、结肠癌、鼻咽癌、神经胶质瘤等[5]。GLS1在多种肿瘤中上调， 因此其可能是一种致癌基因的蛋白产物。有学者[3]发现GLS1在正常肝组织、肝不典型增生结节、鼻咽癌中GLS1表达水平逐步上升， 认为GLS1的表达水平上调有可能是鼻咽癌进展的原因之一。
本研究GLS1表达与鼻咽癌临床病理特征的相关性及患儿预后的关系。结果显示GLS1表达与鼻咽癌的TNM 分期密切相关；总体生存率和无病生存率的预后分析结果显示GLS1高表达患儿预后明显差于低表达患儿（P<0.05）。COX回归单因素和多因素模型结果显示肿瘤分化、TNM分期和GLS1表达是影响小儿鼻咽癌患儿总体生存的独立危险因素。
GLS1高表达与在小儿鼻咽癌的发展过程中起到重要作用。其影响患儿预后的原因可能与调节肿瘤细胞的迁移、增殖、凋亡等生物学行为有关[6]；但其表达上调的原因以及具体的调节机制仍待明确， 进一步探索其在肿瘤发生发展中的作用及机制将对肿瘤的研究起到一定的推动作用， 为抗肿瘤治疗和临床转化提供理论依据[7-10]。
总之， GLS1的高表达在小儿鼻咽癌的发生发展中起到重要作用， 且与患儿的预后密切相关。
参考文献
[1]陈向军， 黄健健， 余兹中， 等. 谷胱甘肽S 转移酶M1和T1基因多态性与鼻咽癌遗传易感性的Meta分析. 浙江临床医学， 2014（8）：1331-1333.
[2]于秀冰， 崔刚.鼻咽癌的临床病理分型特点及临床意义.临床医学研究与实践， 2016， 1（13）：87.
[3]丁静华， 苏法仁， 薄琳， 等.鼻咽癌研究进展.国际耳鼻咽喉头颈外科杂志， 2017， 41（1）：43-46.
[4]楊红茹， 任培蓉， 吴敬波， 等.谷氨酰胺预防鼻咽癌化疗引起的口腔黏膜反应的效果观察.广西医学， 2006， 28（12）：1916-1918.
[5]廖伟伟， 唐锁勤， 刘英， 等.儿童鼻咽癌临床治疗研究.中国当代儿科杂志， 2013， 15（4）：273-276.
[6]Huang F， Zhang Q， Ma H， et al. Expression of glutaminase is upregulated in colorectal cancer and of clinical significance. International Journal of Clinical & Experimental Pathology， 2014， 7（3）：1093.
[7]韩露， 林少俊， 潘建基， 等. 305例鼻咽癌调强放疗预后因素分析. 癌症， 2010， 29（2）：153-158.
[8]韦霖， 岑信棠， 付维， 等. 鼻咽癌研究进展. 中国医学文摘（耳鼻咽喉科学）， 2006（4）：212-215.
[9]马骏. 鼻咽癌治疗的研究进展. 中山大学学报（医学科学版）， 2010， 31（2）：179-185.
[10]黄慧强. 鼻咽癌化疗的研究进. 广东医学， 2002， 23（4）：335-337.
[收稿日期：2017-11-24]