![zoޛ)j馝d}tӘN 7ڑJG8zG8vgM& w玵䯌o h)N ւNuւ^vt8s8}< SKiSKnu]4]m5^tniMv](https://tp.67gu.com/showimg.php?url=http://img.resource.qikan.cn/qkimages/jsxk/jsxk201915/jsxk20191553-1-l.jpg)
材料与方法
1.1 材料与仪器
1.1.1 材料与试剂 牦牛血，四川省大渡河食品有限公司生产;碱性蛋白酶，活性为85.61 U/mg，上海楷洋生物技术有限公司生产;枯草芽孢杆菌SICC1.197，四川省工业微生物资源平台菌种保藏管理中心提供;其他化学试剂，国产分析纯;大豆低聚肽，分子量 <1 ku，西安百川生物科技有限公司生产;鱼胶原低聚肽，分子量<1 ku，济南东轩生物工程有限公司生产。
1.1.2 主要仪器设备 台式高速冷冻离心机，H2050R型，长沙湘仪离心机仪器有限公司生产;恒温振荡培养箱，QYC-2102C型，上海福玛实验设备有限公司生产;紫外可见分光光度计，UV Power型，北京莱伯泰科仪器股份有限公司生产;冷冻干燥机，LGJ-50F型，北京松源华兴科技发展有限公司生产。
1.2 方法
1.2.1 菌酶联合法制备牦牛血抗氧化低聚肽 采用笔者所在试验组前期研究的菌酶联合法[1]制备牦牛血抗氧化低聚肽。将前期制备所得的枯草芽孢杆菌菌液（1×109 CFU/mL）以接种量为2.5 mL/100 mL加入底物浓度为75 g/L的高压灭菌（121 ℃，15 min）牦牛血液中，在35 ℃、135 r/min下恒温振荡培养72 h，发酵结束后经高压灭菌（121 ℃，15 min）得到牦牛血发酵液。待牦牛血发酵液冷却后加入碱性蛋白酶，在酶底比为190 U/g、pH值为9.5、60 ℃的条件下进行酶解3 h，酶解结束后用沸水水浴灭酶活10 min，得到牦牛血酶解液。将牦牛血酶解液在4 ℃、6 000 r/min条件下离心15 min，取上清液用0.45 μm水性微孔滤膜抽滤去除菌体残渣，再将滤液置于5 ku超滤管中在4 ℃、4 000 r/min条件下离心10 min，取上清液得到分子量<5 ku的牦牛血低聚肽;进一步将肽液置于1 ku超滤管中在4 ℃、4 000 r/min条件下离心30 min，得到分子量<1 ku的牦牛血低聚肽。