[摘要] 目的 探讨结肠癌中ILK与p53的表达情况及其与相关临床病理参数之间的关系。 方法 采用免疫组织化学方法检测93例结肠癌中ILK与p53的表达情况，对染色结果进行分析与临床病理参数之间的关系。 结果 在93例结肠腺癌中ILK的阳性表达率为57%（53/93），在93例结肠腺癌中p53的阳性表达率为43%（40/93），p53的表达在性别、年龄、淋巴结转移、肿瘤复发、肿瘤分期、分化程度方面差异无统计学意义（P > 0.05）。 结论 ILK和p53的表达体现了结肠癌的生物学特性，ILK与p53可以作为结肠癌预后的一个生物学标记。
[关键词] 结肠癌；ILK；p53；预后
[中图分类号] R735.3+5 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2013）03（a）-0009-03
结肠癌（colorectal carcinoma，CRC）是最常见的恶性肿瘤，在2008年，结肠癌患者新增病例1 233 000例，约有608 000例死于结肠癌，使得结肠癌成为肿瘤致死排名第四位。许多因素影响结肠癌的预后[1]，如分期、区域淋巴结转移、血管及淋巴管浸润、血液中CEA的表达情况。其他临床病理的预后影响因素包括组织类型、微血管密度。此外分子学标记物在肿瘤的预后因素中也起到越来越重要的作用。结肠癌中现在多种分子标记物都在探索性研究。本研究采用免疫组织化学方法检测结肠癌中整合素连接激酶（ILK）及p53的表达情况及预后意义。
1 资料与方法
1.1 一般资料
收集河北省沧州中西医结合医院2005年5月～2012年8月93例结肠癌根治术后标本。93例患者中，女性46例，男性47例。平均年龄51岁。均无结肠癌家族史。中、高分化结肠腺癌72例，低分化21例；淋巴结转移阳性37例，淋巴结转移阴性56例；Duke分期A期22例，B期35例， C期36例。
1.2 试剂与方法
鼠抗人ILK及p53购于福州迈新生物技术开发有限公司，SP免疫组化试剂盒为Maxin公司产品。所有标本均作5μm厚连续切片，取3片分别进行HE染色，具体操作按试剂盒说明进行，已知阳性片做为阳性对照，PBS替代一抗作为阴性对照。
1.3 结果判定方法
ILK主要为胞质着色，以胞质内出现棕黄色颗粒的细胞为阳性染色细胞，p53以胞核内出现棕黄色颗粒的细胞为阳性染色细胞。每例均随机观察5个高倍视野（×400），用半定量积分法判断结果，阳性细胞率5%为0分，6%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75% 为3分，>75 %为4分；阳性强度黄色为1分，棕黄为2分，棕褐色为3分。两者积分相乘，≥2分为阳性。
1.4 统计学方法
实验数据均应用SPSS 13.0软件包进行统计处理。率的比较采用χ2检验， P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 ILK、p53的表达与临床病理参数之间的关系
在93例结肠腺癌中ILK的阳性表达率为57%（53/93），此外在靠近肿瘤周围的基底细胞正常黏液阳性，但与肿瘤远距离处正常黏膜上皮阴性表达。ILK的表达在肿瘤分期、淋巴结转移方面有明显的差异。Dukes A期与B期肿瘤ILK的阳性表达明显高于Dukes C期（P < 0.05）；淋巴结转移阳性组中ILK的阳性表达率明显高于淋巴结转移阴性组（P < 0.01）。ILK的表达情况在不同性别、年龄、肿瘤复发、分化程度的患者中无明显差异。在93例结肠腺癌中p53的阳性表达率为43%（40/93），p53的表达在性别、年龄、淋巴结转移、肿瘤复发、肿瘤分期、分化程度患者中无明显差异（P > 0.05）。
2.2 联合ILK与p53的表达情况与临床病理参数之间的关系
根据ILK与p53在结肠腺癌中的表达情况分为四组：ILK（+）/p53（-）、ILK（-）/p53（-）、ILK（+）/p53（+）、ILK（-）/P53（+）。在肿瘤分期及是否淋巴结转移方面各组表达情况差异有统计学意义（P < 0.05）。
3 讨论
结肠癌是癌症致死的主要癌症之一。结肠癌的发展是多步骤的，是由于一些分子遗传因素的积累使细胞生长、分化、凋亡紊乱。细胞生长与细胞凋亡的平衡在肠上皮细胞稳态中起着重要的作用，在结肠癌发生发展期间这种平衡被打乱[2]。
ILK在人类膀胱癌、肝癌、卵巢癌、横纹肌肉瘤等组织中均高表达，且表达程度与肿瘤的恶性程度呈正相关[3-6]。动物实验也发现，将ILK过表达的细胞导入裸鼠体内可引发肿瘤[7]。ILK高表达的上皮细胞在软琼脂中不依赖贴壁生长，对悬浮细胞凋亡有抑制作用。在裸鼠中成瘤ILK通过Ser473 激活PKB 来抑制细胞程序性死亡，PKB 抑制细胞程序死亡是通过一系列下游效应物完成的，包括失活磷酸化bcl-2 的伙伴BAD、失活caspase9、通过磷酸化抑制forkhead 转录因子FKHRL21，调控细胞程序死亡导致的FAS配体的表达[8-10]。p53基因是迄今发现与人类肿瘤相关性最高、研究最多的基因之一。该基因突变时，细胞周期失控，某些癌基因得以激活，使细胞无限制地生长，肿瘤的侵袭力增强，淋巴转移的危险性增加[11]。近年来研究表明，p53在大肠癌的发生和发展中起重要作用，并可能作为发生、发展、诊断及预后的重要肿瘤标志物[12-14]。结肠癌中半数出现p53基因的突变，但p53的突变与结肠癌患者的生存期的关系仍然未有定论。有学者研究p53的突变结肠癌的预后生存期长，有的认为相反有p53基因的突变，预后生存期短[15]。
寻找分子生物学标记物，对判断结肠癌的侵袭性很重要，并对结肠癌患者更好的治疗是一个不可缺少的因素。然而现在明确的对结肠癌有预后评估意义的生物学分子很少。单一的生物学因子，现在很难对肿瘤进行评估，因为肿瘤的形成是多基因、多步骤的过程。每一种基因，每一个步骤都对肿瘤的进展及转移有着重要的作用。所以更好地去明确肿瘤发生发展必须要联合多种基因的检测。本研究显示，在93例结肠腺癌中ILK的阳性表达率为57%（53/93），ILK的表达在肿瘤分期、淋巴结转移方面有明显差异。Dukes A期与B期肿瘤ILK的阳性表达明显高于Dukes C（P < 0.05）；淋巴结转移阳性组中ILK的阳性表达率明显高于淋巴结转移阴性组（P < 0.01）。表明肿瘤中ILK的表达与p53阴性表达提示肿瘤的预后要好。ILK与p53与化疗药中多种耐药基因有关，故联合检测ILK与p53在结肠癌中的表达情况对评估药物的敏感性有一定的意义。
[参考文献]
[1] Ibrahim OK，Afolayan AE，Adeniji KA，et al. Colorectal carcinoma in children and young adults in ilorin，Nigeria[J]. West Afr J Med，2011，30（3）：202-205.
[2] Miladi-Abdennadher I，Abdelmaksoud-Damak R，Ayadi L，et al. Expression of p16INK4a，alone or combined with p53， is predictive of better prognosis in colorectal adeno- carcinoma in Tunisian patients[J]. Appl Immunohistochem Mol Morphol，2011，19（6）：562-568.
[3] Gao J，Zhu J，Li HY，et al. Small interfering RNA targeting integrin-linked kinase inhibited the growth and induced apoptosis in human bladder cancer cells[J]. Int J Biochem Cell Biol，2011，43（9）：1294-1304.
[4] McDonald PC，Dedhar S，Keller C. Integrin-linked kinase： both Jekyll and Hyde in rhabdomyosarcoma[J]. J Clin Invest，2009，119（6）：1452-1455.
[5] Lssner D，Abou-Ajram C，Benge A，et al. Integrin alphavbeta3 upregulates integrin- linked kinase expression in human ovarian cancer cells via enhancement of ILK gene transcription[J]. J Cell Physiol，2009，220（2）：367-375.
[6] Peroukides S，Bravou V，Varakis J，et al. ILK overexpression in human hepatocellular carcinoma and liver cirrhosis correlates with activation of Akt[J]. Oncol Rep，2008，20（6）：1337-1344.
[7] Liu BC，Xia HL，Wu JN，et al. Influence of irbesartan on expression of ILK and its relationship with epithelial-mesenchymal transition in mice with unilateral ureteral obstruction[J]. Acta Pharmacol Sin，2007，28（11）：1808-1810.
[8] Kim YB，Choi S，Choi MC，et al. Cell adhesion-dependent cofilin serine 3 phosphorylation by the integrin-linked kinase/c-SRC complex[J]. J Biol Chem，2008，283（15）：10089-10096.
[9] McDonald PC，Fielding AB，Dedhar S. Integrin-linked kinase-essential roles in physiology and cancer biology[J]. Cell Sci，2008，121（19）：3121-3132.
[10] Rooney N， Streuli CH. How integrins control mammary epithelial differentiation： a possible role for the ILK-PINCH-Parvin complex[J]. FEBS Lett，2011，585（11）：1663-1672.
[11] 周思君，詹俊. 大肠癌中P53基因研究进展[J]. 岭南现代临床外科，2011，11（5）：359-362.
[12] 张军，吴毅平. 血清IGF-1水平与组织P53表达在结肠癌诊治中的临床意义[J]. 中国实验诊断学，2008，12（12）：1546-1548.
[13] 丁晖， 潘运龙， 覃莉等. 结肠癌VEGF、p53和CerbB-2蛋白联合表达与肝肺转移的关系[J]. 实用医学杂志，2011，27（9）：1593-1595.
[14] 丁春明，喻钢，朱宝华. P53和c-erbB-2表达与胃癌进展的关系[J]. 实用癌症杂志，2011，26（1）：31-33.
[15] Miladi-Abdennadher I， Abdelmaksoud-Damak R，Ayadi L，et al. Expression of p16INK4a， alone or combined with p53， is predictive of better prognosis in colorectal adenocarcinoma in Tunisian patients[J]. Appl Immunohistochem Mol Morphol，2011，19（6）：562-568.
（收稿日期：2012-12-27 本文编辑：魏玉坡）