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1.4观察指标 计算SIRT6、HIF-1α在TNBC乳腺组织标本、转移淋巴结及癌旁组织中的表达阳性率，分析二者的表达结果与患者的年龄、肿瘤生长大小、是否绝经等因素的关系，以及与癌组织的分化水平、临床TNM分期、淋巴结转移情况是否存在相关性。
1.5评价标准 在高倍镜下进行观察癌细胞数量，SIRT6、HIF-1α均以细胞膜和（或）细胞质染色。几乎不染色为阴性（-）;且浅黄为弱阳性（+）;棕黄染阳性（++）;深棕染强阳性（+++）。Sirt6蛋白和HIF-1α蛋白在乳腺癌组织中主要定位于细胞质，呈棕黄色或棕褐色颗粒。根据阳性细胞数和着色深度计分，每例均随机观察计数5个高倍视野（×400），确定每个视野的阳性率，取平均数，按下列计分：阳性细胞≤5%为0分，>5%～25%为1分，>25%～50%为2分，>50%～75%为3分，>75%为4分。阳性细胞表达的着色深度：基本不着色为0分，黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。将两项积分相乘：≥1为阳性，<1为阴性。
1.6统计学方法 所有数据、结果均用Excel录入，SPSS17.0统计软件包分析，计数资料以（%）表示，采用？字2检验四格表资料的Fisher确切概率法、多组等级比较采用Spearman等级相关性分析，以P<0.05表示差异有统计学意义。
2结果
2.1 SIRT6、HIF-1α在TNBC乳腺中的表达 SIRT6在TNBC乳腺癌组织、转移淋巴结及癌旁组织均有表达，前两者均高于后者，差异有统计学意义（？字2=29.803，P<0.05）。HIF-1α在TNBC乳腺癌组织、转移淋巴结及癌旁组织均有表达，前者两者均高于后者， 差异有统计学意义（？字2=50.602，P<0.05），见表1。
2.2 SIRT6、HIF-1α在TNBC乳腺癌组织中的表达与其临床病理特征的关系 SIRT6与TNBC乳腺癌组织的分化水平、临床TNM分期、淋巴结转移情况相关（P<0.05），与患者的年龄、肿瘤生长大小及是否绝经无相关性（P>0.05）;HIF-1α与TNBC乳腺癌的组织分化水平、临床TNM分期、淋巴结转移情况相关（P<0.05），而与患者的年龄、肿瘤生长大小及是否绝经无相关性（P>0.05），见表2。
2.3 TNBC乳腺癌组织和癌旁组织中SIRT6、HIF-1α表达相关性分析 两者均在癌组织中出现高表达，且在癌旁组织中出现低表达。结果显示SIRT6、HIF-1α表达呈正相关性（r=0.823），差异具有统计学意义（P<0.05），见表3。
3讨论
肿瘤细胞的持久分裂能力和导致人体衰老死亡的过程看起来似乎是对立状态，但事实上癌变和衰老过程中的分子变化以及细胞层面的生物学基础却是极为相似[3]。SIRT6在癌变过程中起到非常重要的作用，研究表明，SIRT6 的缺失使得糖酵解增加并通过某些途径使之上调了相关基因的表达，刺激和促进了核糖体的生成，进而导致肿瘤的异常增殖，这表明其在肿瘤的形成以及维持过程中起到非常重要的作用[4]。除此之外，通过临床样本的数据分析，可以发现 SIRT6 在多种恶性肿瘤疾病中的表达水平与患者的生存、预后密切相关[5]。HIF-1是具有转录活性的一种核蛋白，拥有广泛的靶基因谱。HIF-1α基因定位于人的14 号染色体，受缺氧信号的直接调控，其作为HIF-1的活性亚基，HIF-1α是组织缺氧区域内的最重要的标记物，是调控细胞代谢途径转换过程的重要因子，有学者推测SIRT6可通过影响HIF-1α表达调控Warburg效应[6]，最终实现对肿瘤细胞分化增殖活性的调控。
目前，SIRT6和HIF-1α蛋白联合监测在宫颈癌、肝癌、胃癌中的表达相关研究较多，二者可作为肿瘤标志物监测肝癌、胃癌的演变[7]。但关于两种蛋白SIRT6和HIF-1α联合检测在乳腺癌中的研究鲜见报道。同时，可以推测SIRT6是否能加强HIF-1α对多种糖酵解相关酶如PFK1、葡萄糖转运蛋白1等的影响，从而加快细胞代谢转换过程，调控肿瘤细胞增殖。具体实验步骤需进一步设计;如果这个推论成立，将可能对TNBC乳腺癌的治疗提供更多的思路。
本研究发现SIRT6、HIF-1α在TNBC乳腺癌组织，转移淋巴结中的阳性率均高于癌旁正常组织的阳性率，揭示其在TNBC乳腺癌的恶变与转移中能够起到促成作用。在60例TNBC乳腺癌中，SIRT6、HIF-1α在有淋巴结转移组中的阳性率高于无结转移淋巴结组，差异有统计学意义（P均<0.05）;说明SIRT6、HIF-1α可能与TNBC乳腺癌淋巴结的侵袭转移有相关性。并且SIRT6、HIF-1α在TNBC乳腺癌的组织分化程度、临床TNM分期及淋巴结转移相关（P<0.05），而与患者年龄、是否绝经及肿瘤大小无相关性（P>0.05）;证明了过表达的SIRT6、HIF-1α对TNBC乳腺癌的进展过程可能起到一定作用，可认为是TNBC患者预后不良的标志。最后在TNBC癌组织中SIRT6、HIF-1α呈现正相关（r=0.823，P<0.05）。提示两者在TNBC乳腺癌发生发展中起到协同作用，并且SIRT6能上调HIF-1α的表达，同时也预示在其高表达时有复发转移的可能，为TNBC乳腺癌治疗提供新的靶点及研究方向。
综上所述，TNBC乳腺癌组织中SIRT6和HIF-1α的表达升高，且其协同参与TNBC乳腺癌的进展和复发，检测二者对于指导TNBC乳腺癌的早期发现、治疗及预后具有重要参考意义。然而，本次研究样本量较少，不同地域、种族等可能会存在差异，相关研究结论有待大样本、多中心的研究进一步去证实。
参考文献：
[1]Gil R，Barth S，Kanfi Y，et al.SIRT6 exhibits nucleosome dependent deacetylase activity[J].Nucleic Acids Res，2013（41）：8537-8545
[2]Schuster S，Roessler C， Meleshin M，et al.A continuous sirtuin activity assay without any coupling to enzymatic or chemical reactions[J].Sci Rep，2016（6）：22643.
[3]Nagai K，Matsushita T，Matsuzaki T，et al.Depletion of SIRT6 causes cellular senescence，DNA damage，and telomere dysfunction in human chondrocytes[J].Osteoarthr Cartilage，2015（23）：1412-1420.
[4]Elhanati S，Kanfi Y，VArvak A，et al.Multiple regulatory layers of SREBP1/2 by SIRT6[J].Cell Reports，2013（4）：905-912.
[5]Wei L，Zhou Y，Qiao C，et al.Oroxylin A inhibits glycolysis-dependent proliferation of human breast cancer via promoting SIRT3-mediated SOD2 transcription and HIF-1αdestabilization[J].Cell Death Dis，2015（6）：e1714.
[6]Shiraishi T，Verdone JE，Huang J，et al.Glycolysis is the primary bioenergetic pathway for cell motility and cytoskeletal remodeling in human prostate and breast cancer cells[J].Oncotarget， 2015，6（1）：130-143.
[7]Ciavardelli D，Rossi C，Barcaroli D，et al.Breast cancer stem cells rely on fermentative glycolysis and are sensitive to 2-deoxyglucose treatment[J].Cell Death Dis，2014（5）：e1336.
收稿日期：2018-11-29;修回日期：2018-12-12
編辑/肖婷婷