摘 要：为了解乌龙江湿地土壤真菌群落结构组成及动态变化，本研究通过稀释平板法对湿地土壤可培养真菌数进行测定，并采用变性梯度凝胶电泳（DGGE）技术分析乌龙江湿地土壤真菌群落结构。平板计数结果表明，不同时间不同采样点可培养真菌数的变化幅度较小，每克干土中可培养真菌数介于0.13×104～8.26×104 CFU。真菌18S rDNA的PCR-DGGE图谱显示，每个泳道条带的位置、数目和亮度各有不同，说明不同采样时间不同采样点土壤真菌群落结构存在着差异。DGGE图谱条带多样性分析结果表明，2009年3月、2009年11月和2010年1月所采集土壤样品的真菌群落多样性较其他时间更为丰富；从采样点来看，真菌群落丰富度则表现为样品L>样品M>样品R。对DGGE主要条带和差异性条带进行克隆测序后发现，乌龙江湿地土壤主要真菌类群为子囊菌Ascomycota和毛霉菌Mucoromycota。
关键词：乌龙江湿地；土壤真菌；群落结构；PCR-DGGE；多样性分析
中图分类号：Q 938.1文献标识码：A文章编号：1008-0384（2018）08-835-07
Abstract： Composition and dynamics of the fungal community in soil of Wulongjiang wetlands were studied. The classical plate count and the denatured gradient gel electrophoresis （DGGE） were applied to determine the cultivable population and diversity of the community. The plate counts of the samples averaged between 0.13×104 and 8.26×104 CFU per g of dry soil with no significant difference due to the locations or time of collection. On the other hand， the PCR-DGGE patterns of 18S rDNA （V1+V2） fragments exhibited variations on the positions， number and lightness of the bands from different lanes， indicating compositional differences among the fungal populations. The DGGE bands digitally analyzed by Quantity One software and the derived Shannon-Wiener index， evenness and abundance showed greater diversities in the samples obtained in March 2009， September 2009 and January 2010 than other times of a year. They also unveiled the differences in abundance of Sample L> Sample M> Sample R. The dominant fungi in the soil were identified to be Ascomycota and Mucoromycota according to a sequence analysis on the DGGE bands.
Key words： Wulongjiang wetland； soil fungi； community composition； PCR-DGGE； diversity analysis
濕地生态系统是地球最重要的三大生态系统之一，兼有水体和陆地的双重特征，其在物质循环、能量流动、污染净化、生态平衡等方面发挥着重要的作用[1]。微生物作为湿地生态系统的重要组成部分，是影响湿地物质循环和污染物去除的关键因素[2]。因此，开展湿地微生物组成和功能多样性研究有利于揭示湿地资源构成及生命机制，对湿地生态平衡和健康修复具有重要的理论价值和现实意义[2-3]。
湿地土壤中蕴含着丰富的微生物资源。据估计，土壤中可培养的微生物在自然界中仅占0.1%～10.0%。因此，采用传统的微生物培养技术很难客观、全面地反映土壤中微生物的真实情况，造成微生物多样性被严重低估[2，4-5]。分子生物学方法则直接从基因水平分析土壤微生物，可以反映土壤中绝大部分的微生物信息，开创了土壤微生物研究的新局面，是目前应用于湿地土壤微生物研究的重要方法[6]。在诸多研究湿地土壤微生物多样性的分子生物学方法中，PCR-DGGE技术因稳定性高、操作简便等优点已被广泛应用[7-9]。
闽江口湿地是福建省重要湿地之一，位于福建闽江下游福州辖区内，是闽江的入海口，地理位置特殊。乌龙江湿地公园位于乌龙江畔，属于三环外侧的闽江口湿地，总面积243 hm2，是福州市区唯一的湿地公园。自建成以来，发挥了良好的生态效应，堤外的芦苇荡原生态区引得大量候鸟前来栖息。佘晨兴[10]和曾志华[11]等对闽江湿地土壤产甲烷菌进行了相关研究，但鲜见关于闽江湿地真菌群落结构方面的研究报道。本研究选取乌龙江湿地土壤样本，采用PCR-DGGE技术分析不同采样时间不同采样点真菌群落结构的异同，以期明确乌龙江湿地真菌群落结构的时空变化规律，为开发微生物资源和保护湿地环境提供科学依据。
1 材料与方法