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doi：10.3969/j.issn.1007-614x.2014.18.73
摘要目的：探讨胰岛素样生长因子1（insulin-like growth factor 1，IGF-1）在口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma，OSCC）组织中的表达，并分析IGF-1的表达水平与口腔鳞癌患者各临床病理特征及其预后的关系。方法：采用免疫组织化学方法检测80例口腔鳞癌患者癌组织及20例正常口腔黏膜组织中IGF-1的表达。结果：①高、中、低分化口腔鳞癌IGF-1表达阳性率分别为44.1%、53.6%和72.2%（P>0.05）；IGF-1表达与口腔鳞癌的病理分级呈正相关（rs=0.245）。②IGF-1表达阳性率在Ⅲ～Ⅳ期组、有颈部淋巴结转移组中分别明显高于Ⅰ～Ⅱ期组、无颈部淋巴结转移组（P<0.05）。③IGF-1阴性表达的口腔鳞癌患者3年生存率（71.4%）明显高于阳性者的（29.0%）（P<0.05）。结论：口腔鳞癌组织中IGF-1表达与肿瘤的分期、分化程度、淋巴结转移及预后有关。
关键词口腔鳞癌胰岛素样生长因子-1临床病理特征
Expression and clinical significance of IGF-1 in oral aquamous cell carcinoma
Lu Changlai，Xue Xiaoe
Department of Oncology，Nanjing Kang’ai Hospital，Jiangsu 210037
AbstractObjective：To investigate the expression of insulin-1ike growth factor 1（IGF-1） in oral squamous cell carcinoma（OSCC） tissues and analyze the clinicopathologic features and outcomes of OSCC on basis of IGF-1 expression.Methods： Immunohistochemical technique was used to detect the expression of IGF-1 in OSCC tissues（n=80） and normal tissues（n=20）. Results：①IGF-1 was positively expressed in cases of well differentiated（44.1%），moderately differentiated（53.6%） and poorly differentiated（72.2%）（P>0.05），and it showed positive correlation with pathological grade of OSCC（r=0.245）.②The expression rate of IGF-1 in stageⅢ，Ⅳand cases with positive neck lymph node groups was significantly higher than that ofⅠ，Ⅱand those with negative neck lymph node（P<0.05）.③The 3-year survival in OSCC patients with IGF-1 negative was significantly longer as compared with those with positive IGF-1（71.4% vs 29% ，P<0.05）.Conclusion：IGF-1 expression level in OSCC tissues is associated with tumor stage and differentiation，involvement of lymph node metastasis and prognosis.
Key wordsOral squamous cell carcinoma；Insulin-1ike growth factor 1；Clinicopathologic feature
IGF-1是一种功能广泛的多肽因子，三维结构与胰岛素非常相似[1]。近些年来，国内外学者研究表明，IGF-1能在多种恶性肿瘤组织中表达，但是在不同肿瘤间，以及同种肿瘤在不同患者之间，IGF-1的异常表达都会存在一定程度上的差异[2，3]。本研究通过检测口腔鳞癌患者肿瘤组织IGF-1的表达情况，探讨其与口腔鳞癌临床病理特征及预后的关系，为临床诊断、治疗口腔鳞癌提供理论依据。
资料与方法
本研究所采用石蜡包埋组织标本选自皖南医学院附属弋矶山医院和南京康爱医院病理科2003年3月-2011年3月80例口腔鳞状细胞癌手术患者。术前均未做放疗、化疗及生物治疗，术后病理诊断均为口腔鳞状细胞癌。其中男43例，女37例，年龄40～83岁；临床分期Ⅰ期29例，Ⅱ期23例，Ⅲ期16例，Ⅳ期12例；所有入组的患者都是经过两位具有丰富临床经验的病理医师来进行临床病理分级，在这些患者中，高分化鳞癌34例，中分化鳞癌28例，低分化鳞癌18例。并且在术后，根据具体的检查结果，来确定患者是否发生了淋巴结转移，结果显示：淋巴结转移24例。此外，我们收集了20例健康成年人的正常口腔黏膜，他们都未接受过任何治疗。
试剂：在本研究中，我们主要使用的试剂是兔抗人IGF-1多克隆抗体（浓缩型，BA0362，Rabbit anti-IGF-1）SABC免疫组化试剂盒及DAB显色试剂。
试验方法：首先对石蜡标本4μm厚连续切片，第1张切片用于HE染色，第2张切片用于IGF-1免疫组织化学染色法，第3张切片用于免疫组化对照染色。实验的操作步骤和方法严格按照试剂盒的说明来进行。阳性对照采用已知的阳性片做阳性对照，用PBS缓冲液代替一抗和二抗作阴性对照，结果应为阴性。
结果判定：如果是阳性结果，则应该为IGF-1染色后细胞质呈棕黄色颗粒，我们选择两位临床经验丰富的病理医师来对所有的染色片进行双盲阅片，计分时所参照的标准是肿瘤细胞阳性率和着色强度的不同。按阳性肿瘤细胞比例计分：如果在某张切片中，观察时发现在视野中存在的阳性肿瘤细胞数<5%，则结果计0分，阳性肿瘤细胞数在6%～25%，则结果计1分，阳性肿瘤细胞数在26%～50%，则结果计2分，阳性肿瘤细胞数在51%～75%，则结果计3分，阳性肿瘤细胞数>75%，则结果计4分。按着色程度计分：如果对某张切片进行观察时，发现其中肿瘤细胞的着色和背景的颜色相似，则结果计0分；如果发现肿瘤细胞的着色浅、略高于背景，则结果计1分；如果发现肿瘤细胞是中度着色、明显高于背景，则结果计2分；如果发现肿瘤细胞强染、着色很深，则结果计3分。两项计分相乘后分4级：0分阴性（-），1～4分弱阳性（+），5～8分阳性（++），9～12分强阳性（+++）。
统计学处理：对于本研究中所有的数据资料，我们均采用SPSS 11.5统计软件包进行相应的统计学分析和处理，采用χ2检验，相关性分析采用Spearman等级相关分析，检验水准α=0.05。
结果
IGF-1在口腔鳞状细胞癌组织表达情况：80例口腔鳞癌组织中IGF-1阳性表达43例，阴性表达37例，阳性表达率53.75%，其中强阳性（+++）15例，阳性（++）14例，弱阳性（+）14例。IGF-1阳性表达主要显示在口腔鳞癌细胞胞质内，呈棕黄色片状或颗粒样分布，可见于大多数角化珠周围及癌巢中的肿瘤细胞（图1），也可见于部分肿瘤间质细胞如单核巨噬细胞等炎性细胞胞浆中。IGF-1的表达阳性率与口腔鳞癌的分化程度、临床分期及颈部淋巴结转移有一定的相关性。正常口腔黏膜组织中未发现IGF-1因子的表达，两组比较差异有统计学意义（P<0.001）；另外有鳞癌侵犯的涎腺组织中，腺泡和腺管细胞呈阳性表达，表达位于腺细胞胞浆内，呈棕黄色。而正常涎腺细胞不表达或呈弱阳性表达，见表1。
IGF-1表达与肿瘤预后的关系：在获得随访的45例口腔鳞癌患者中，术后3年生存19例，死亡26例。生存19例患者中，阳性表达9例，阴性表达10例；死亡的26例患者中，阳性表达22例，阴性表达4例，见表2。
讨论
IGF-1在正常成人组织细胞中，免疫组化表达呈弱阳性或阴性，在一些病变组织中表达呈强阳性。随着对胰岛素样生长因子家族研究的深入，人们发现IGF-1也是一种自分泌或旁分泌的癌基因，与肿瘤关系十分密切，多种类型的肿瘤细胞可异常表达IGF-1，并通过内生性IGF-1的合成促进自身的生长[4，5]。
赵玉林等人通过对喉鳞癌组织中IGF-1的表达研究，发现鳞癌中病理分级越高及分化程度越低，IGF-1的阳性表达率越高，正常喉部黏膜组织中阳性表达率较低[6]。本研究结果表明，IGF-1表达位于口腔鳞癌肿瘤细胞胞质中，并且在正常口腔黏膜不表达，表达的阳性率随着肿瘤的病理分级增高有明显增高趋势，高、中、低分化癌组织阳性表达率分别为44.1%、53.6%、72.2%，并且阳性表达也越强，但组别之间差异无统计学意义（P>0.05），这可能与高、中、低分化肿瘤的构成比有关。因此，我们推测：①IGF-1因子有类似胰岛素样作用参与肿瘤糖代谢途径；②IGF-1具有促有丝分裂的作用，通过自分泌和旁分泌机制保护肿瘤细胞逃避凋亡、促进肿瘤细胞的形成与增值、调节癌基因与抑癌基因的表达[7]。
有研究表明，一方面IGF-1可以促进肿瘤血管的形成[8]；另一方面IGF-1刺激淋巴内皮细胞增殖及迁移，刺激淋巴上皮细胞的运动并且诱导淋巴管的形成。我们对口腔鳞癌的研究发现，在TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期的口腔鳞癌组织中IGF-1的阳性表达率71.4%（20/28），明显高于Ⅰ+Ⅱ期IGF-1阳性表达率44.2%（23/52）（P< 0.05）；有颈淋巴结转移的口腔鳞癌组IGF-1阳性表达率75.0%（18/24），明显高于无颈淋巴结转移组患者IGF-1阳性表达率44.6（25/56）（P<0.05）。经相关分析，IGF-1因子表达水平与TNM分期、颈部淋巴结转移均呈正相关（Rs值分别为0.249和0.32），表明IGF-1因子促进肿瘤的生长，诱导淋巴管形成加速其向周围及远处淋巴结转移。
有研究资料表明，IGF-1的高表达患者预后较差，5年生存率较低[9]。本研究结果表明，IGF-1阳性表达患者3年生存率（29.0% ）明显低于表达阴性患者（71.4%），差异有统计学意义（P<0.05）。我们认为，IGF-1参与肿瘤组织的营养代谢，促进肿瘤增长并且向周围组织浸润，诱导肿瘤组织的血管和淋巴管生成有关。
IGF-1因子在正常口腔涎腺中表达较弱或不表达，我们观察到被鳞癌侵犯的涎腺组织两种因子的表达呈强阳性。另外，作者在本实验中观察到某些口腔鳞癌间质中有多少不等的巨噬细胞浸润，并且其胞质中IGF-1呈不同程度阳性表达。我们认为，一方面，IGF-1可以诱导巨噬细胞和中性粒细胞产生超氧离子，促进巨噬细胞产生肿瘤坏死因子-α，杀伤肿瘤细胞[10]；另一方面，IGF-1对细胞周期有调控作用使肿瘤组织可以释放某些有利于表皮生长、分化的因子如表皮生长因子，促进涎腺组织细胞分裂并参与腺体免疫球蛋白IgA的分泌调控，对肿瘤免疫有一定的作用[11]，其机制有待于进一步研究。
总之，本研究结果表明，IGF-1阳性表达与口腔鳞癌的发生、发展、颈部淋巴结转移及预后等密切相关。IGF-1的研究对口腔鳞癌的预防、判断预后以及肿瘤治疗药物的开发研究具有重要的临床意义。
参考文献
1Langford K，Nicolaides K，Miell JP.Maternal and feta1 insulin like growth factors and their binding proteins in second and third trimesters human pregnancy[J].Hum Reprod，1998，（13）：l389-1393.
2张雪英，吉兆宁.胃癌中IGFBP-2、IGFI、IGFIR的表达及意义[N].皖南学院学报， 2008，2（4）：98-102.
3Call R，Grimsley M，Cadwallader L，et al.Insulin-carcinogen or mitogen Preclinical and clinical evidence from prostate，breast，pancreatic，and colorectal cancer research[J].Postgraduate Medicine，2010，122（3）：158-165.
4Kim JH，Cho YH，Park YL，et al.Prognostic significance of insulin growth factor-I receptor and insulin growth factor binding protein-3 expression in primary breast cancer[J].Oncol Rep，2010，23（4）：989-995.
5Sichani MM，Yazdi FS，Moghaddam NA，et al. Prognostic value of insulin-like growth factor-1 receptor expression in renal cell carcinoma[J].Saudi J Kidney Dis Transp l，2010，21（1）：69-74.
6赵玉林，王明婧.喉鳞状细胞癌组织中胰岛素样生长因子-Ⅰ与胰岛素样生长因子-Ⅰ受体蛋白的表达[J].郑州大学学报，2009，44（1）：87-91.
7Ouban A，Murca P，Yeatman T，et al.Expression and distribution of insulin-like growth fac- tor-1 receptor in human carcinomas[J].Hum Pathol，2003，34（8）：803-808.
8BorndahlM，CaoRnissenL.Insulin-like growth factor 1and 2 induce lym-phangenesis in vivo[J].Protl Acad Sci USA，2005，102（43）： 593-598.
9尹述成，周绪红，彭涛，等.胰岛素样生长因子-1受体蛋白在鼻咽癌细胞中的表达及临床意义[J].临床耳鼻喉头颈外科杂志，2008， 22（19）：874-877.
10 Tu WW，Cheung PT，Lau YL.IGF-1 increases interferon and IL-6 mRNA expression and protein production in neonatal mononuclear cells[J].Pediatr Res，1999，46：748-754.
11高家让.涎腺恶性肿瘤病人免疫功能测定与近期预后关系的初步探讨[J].华西口腔医学杂志，1984，2（1）：27-30.