doi：10.3969/j.issn.1007-614x.2014.2.68
摘 要 目的：探讨41例直肠癌92枚系膜根部淋巴结微转移状态，以及淋巴结微转移对淋巴结分期的影响。方法：对41例直肠癌92枚系膜根部淋巴结行间断连续切片结合细胞角蛋白20抗体免疫组织化学染色方法检测淋巴结微转移，并进行统计学处理。结果：41例直肠癌患者92枚肠系膜下动脉根部淋巴结发生微转移9例11枚。结论：CK免疫组化技术可以显著提高直肠癌淋巴结转移的检出率，有助于更准确地进行临床病理分期，为直肠癌全系膜切除（TME）提供理论依据。
关键词 淋巴结微转移 细胞角蛋白20 直肠癌
Using CK20 to detect Lymph node micrometastasis of Mesenteric root of rectal cancer and its clinical significance
Meng Zhaoqing
Second Department of general surgery of Dandong Central Hospital of Liaoning Province，118000
Abstract Objective：To explore the 92 Mesenteric root Lymph node micrometastasis of 41 cases and the effect of Lymph node micrometastasis on staging of lymph nodes.Methods：We detected 92 Mesenteric root Lymph node micrometastasis of 41 cases by continuous sectioning and cytokeratin 20 antibody immunohistochemical staining method.The results were statistically analyzed.Results：11 pieces of 9 cases had Lymph node micrometastasis in these patients.Conclusion：CK immunohistochemical technique can significantly improve the detection rate of lymph node metastasis of rectal cancer，contribute to a more accurate clinical staging for rectal total mesorectal excision and provide a theoretical basis for TME.
Key words Lymph node micrometastasis；Cytokeratin 20；Rectal cancer
淋巴结微转移指一些恶性肿瘤在早期的浸润中，虽然向周围的淋巴结发生了浸润转移，但转移的肿瘤细胞非常少，尚不能形成肿瘤结节，如果我们此时对患者进行检查，不能发现其有特殊的临床表现，常规的辅助检查也无法及时发现这些微小的转移病灶。淋巴结转移对直肠癌患者的预后和生存质量有着很大程度的影响，肠系膜根部淋巴结在直肠癌淋巴引流途径中是第3站，第3站淋巴结发生转移，意味着直肠癌已经扩散，并将直接关系到患者的预后。美国癌症协会（AJCC）制定的第6版TNM分期标准，将结直肠癌淋巴结分期改成以受累的淋巴结数目来确定，淋巴结微转移的存在势必直接影响淋巴结分期。为此，笔者用免疫组化技术检测41例直肠癌患者92枚肠系膜下动脉根部淋巴结微转移，现报告如下。
资料与方法
2010年9月-2013年6月行直肠癌根治术TME的41例患者的肠系膜根部淋巴结92枚，男29例，女12例，年龄34～74岁，平均61岁。所有患者临床病理分期按美国癌症协会（AJCC）制定的TNM分期标准。
主要试剂：①人单克隆细胞角蛋白CK20（即用型）；②兔抗鼠S-P超敏试剂盒（链霉素抗生素蛋白-过氧化酶免疫组织化学染色超敏试剂盒）；③0.05% DAB显色剂。
实验方法：①实验取材：41例直肠癌患者术中所取肠系膜淋巴结共92个。②常规组织病理染色。③免疫组织化学染色：对这些患者采用S-P免疫组织化学染色。④误差控制：对实验结果进行阴性和阳性对照，其中以PBS为阴性对照，以原发胃癌组织CK20免疫组织化学染色切片为阳性对照。⑤结果判定：从福建迈新生物技术开发公司购买了阳性片，阳性结果则以该片为标准。经CK20染色后，恶性肿瘤的染色较深，常为棕黄色，并且细胞的周围染色最为明显。而正常的组织细胞则无染色。所以如果在淋巴结中发现CK20染色后呈棕黄色的细胞则为肿瘤细胞[1]。
结 果
如果对直肠癌患者进行CK20染色，患者的肿瘤细胞与正常细胞染色有着显著的不同，肿瘤细胞的胞浆染色较强，并且以细胞的周边部最为显著。对于本实验入组的41例直肠癌患者，92枚肠系膜根部淋巴结在进行常规的病理检查时未发现有转移的肿瘤细胞，而当使用CK20染色时，发现其中9例11枚淋巴结存在微转移。在9例存在微转移的患者中，有2例患者有2个淋巴结受累，另外2个患者则各有一个淋巴结受累。经过CK20染色发现的微转移病灶中未发现有大量的肿瘤细胞，仅发现有1～3个的细胞聚集，这些细胞聚集的部位常以边缘窦为主[2]。同期病例常规病理染色肠系膜根部淋巴结转移率17.9%，微转移检出率23.7%，这大大提高了肠系膜根部淋巴结转移的检出率[3]。
讨 论
对直肠癌患者进行常规检查，很难发现其早期的转移病灶，而淋巴结微转移检测可以及时发现早期的转移病灶，从而对患者的并且做出正确的估计，也有利于为患者选择更加适合的手术方式和对患者的预后康复情况进行更加精确的判断。对直肠癌患者进行微转移检测，发现其有周围淋巴细胞的微转移，则应该为其采取直肠癌根治术，而提高淋巴结的阳性检出率是准确评价其微转移的前提。但是目前淋巴结转移的临床检测主要依靠常规病理学检测，敏感性较差，尤其切片数量不够，苏红染色质量不好时，如果患者存在着散在的早期的微小的转移病灶则很难被发现。而由于免疫组化技术有着不同于常规的检查方法，它可以对这些微小的转移病灶进行精准的检测。在本研究中笔者就采用了免疫组化技术对直肠癌患者进行检测，它可以对精确的检测直肠癌系膜根部转移淋巴结内CK20的表达情况，根据这个检测结果就可以对该患者进行正确的临床分期。本研究使用的检测方法为间断连续切片法和CK20免疫组化相结合的方法，通过这两种方法的结合可以对直肠癌患者的淋巴结的微转移进行更加精确的测定，这样可以帮助学者检测出直肠癌患者一些早期的淋巴结转移病灶，从而能够对这些直肠癌患者做出一个更加正确的临床分期，以利于为患者在合适的时机选择合理的手术方式，并能更加准确的估计患者的手术效果和预后。
参考文献
1 Isozaki H.Evaluation of lymph node metastasis on serial sectioning in gastric cancer with radical lymphadenectomy[J].Hisological Hepato-Gastro-enterology，1997，44（16）：113.
2 Chikara K，Hiroshi S，Masato N，et al.Indications for pancreaticosplenectomy in advanced gastric cancer[J].Hepatogastroenterology，2001，48（39）：908-912.
3 张学峰，王夫竟.CK20检测在大肠癌微转移中的意义[J].齐齐哈尔医学院院报，2008，29（4）：457-458.