[摘要] 目的:探讨并建立合适的影响Sysmex-1800i仪器血小板计数的复检原则。方法:利用Sysmex-1800i血细胞分析仪对450例血液样本进行分析,分为红细胞不同的MCV组、血小板内在因素组、采血因素组。并对各组血小板进行显微镜手工计数及相应的血涂片复查。结果:①MCV≥80 fl和70 fl≤MCV<80 fl时,仪器与手工法结果间差异无统计学意义(P>0.05);60 fl≤MCV<70 fl时,仪器法与手工法间差异有统计学意义(P<0.05);MCV<60 fl,仪器法与手工法间差异有统计学意义(P<0.05)。②血小板直方图异常及大血小板,仪器法与手工法间差异有统计学意义(P<0.05);血小板聚集时仪器所测数值与血片所见血小板数量差异显著。③不同采血方式血细胞分析检测结果的影响如在可接受的范围之内,利用EDTA-k2真空负压管采集静脉血具有结果稳定、样本量多、便于复查等诸多优点,在优先静脉采血的同时可根据临床实际情况选择样本类型及采血容器。当出现血小板减少的数据,应重采静脉血,并进行手工血小板计数。结论:红细胞MCV≤70 fl或者血液标本不合格及血小板结果和临床不相符时,有必要进行人工血小板计数。
[关键词] 血小板计数;Sysmex-1800i血液分析仪;红细胞平均体积
[中图分类号] R44[文献标识码] B[文章编号] 1673-7210(2010)05(c)-072-03
Influence factor on the rules of duplicate examination of Sysmex-1800i blood analyzer for platelet count
ZHANG Xia
(Clinical Laboratory of the First People"s Hospital of Kunming, Kunming 650011, China)
[Abstract] Objective: To discuss and establish proper duplicate examination rules of Sysmex-1800i blood analyzer for platelet count. Methods: We used Sysmex-1800i blood analyzer to detect 450 blood samples which were divided into three groups, group of red blood cell with different MCV,group of platelet with different internal factor and varied methods of taking blood group. Counted the platelet by manual under the microscope and reviewed by blood smear. Results:①MCV≥80 fl and 70 fl≤MCV<80 fl, there was no difference between instrument and hand for platelet count (P>0.05), but when 60 fl≤MCV<70 fl, the difference existed (P<0.05). MCV<60 fl, also, there was difference between the two methods (P<0.05).②Difference wasobservedbetween the methods of instrument and hand when big platelet or abnormal platelet histogram (P<0.05). When platelet aggregation there was significantly different between platelet count measured by equipment and blood smear.③If the results of blood analysis could be accepted under different methods of taking blood, it has advantages of stable results, plenty of samples and easy to review by using the EDTA-k2 vacuum blood collection tube. Venous blood, while giving priority to the clinical situation can select the sample type and blood containers. When thrombopenia was detected, the venous blood should be taken again and count the platelet by hands. Conclusion: MCV≤70 fl of the red blood cell, the samples was not qualified, the results and the clinical findings do notmatch, it is necessary to count the platelet by hands.
[Key words] Platelet count; Sysmex-1800i Blood Analyzer; Mean cell volume
自动血细胞分析仪首次使用至今已有半个世纪,引入我国也近20年。如何能够让全自动血细胞分析仪更好地为临床服务,一直是各国血液学专家共同关注的问题[1]。据文件检索,尚未见对各项影响设备血小板计数因素而制订的复检原则报道。因而针对影响Sysmex-1800i血液分析仪血小板计数的因素,探讨并制订相关复检原则有重要的实用价值。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 仪器Sysmex-1800i血液分析仪由希森美康医用有限公司生产。Olympus双目显微镜由日本Olympus公司生产。改良牛巴血细胞计数盘由上海市求精生化试剂仪器公司生产,EDTA-K2由江苏吉春医用器材有限公司提供。
1.1.2 试剂血液分析仪试剂由希森美康医用有限公司提供的原装配套试剂。血小板手工法稀释液(草酸铵稀释液)严格按《全国临床检验操作规程》[2]配制。
1.1.3 标本来源450例标本均来自我院门诊及住院患者。
1.1.4 校准品和质控品均为希森美康医用有限公司提供的配套产品。
1.2 实验方法
根据实际工作中常见影响血小板计数的因素分为三组实验。
1.2.1 红细胞因素按平均红细胞容量(MCV)大小将患者标本分成MCV≥80 fl、70 fl≤MCV<80 fl、60 fl≤MCV<70 fl、MCV<60 fl 四组,每组50例,所有血液标本采集后用经严格质控、性能稳定的Sysmex-1800i血液分析仪在1 h内进行检测。手工血小板计数按全国临床检验操作规程严格操作,对上述每份标本进行血小板手工计数,每份标本重复计数2次,取平均值。
1.2.2 血小板内在因素根据检测结果中血小板直方图、血小板平均体积(MPV)、血小板分布宽度(PDW),从中筛选出正常体积血小板、大血小板、血小板聚集标本者,每组50例。手工血小板计数按全国临床检验操作规程严格操作,对上述每份标本进行血小板手工计数,每份标本重复计数2次,取平均值。
1.2.3 采血因素首先要求采血人员技术操作熟练,采集末梢血注意皮肤保暖,针刺应稍深使血流通畅,不能用力挤压。随机选择在我院门诊检验科进行血细胞分析的患者50例,对同一患者按采血方式与采血容器的不同组合同时采2种EDTA抗凝血样:①采集2 ml静脉血置于真空负压管;②采集末稍血160 μl置于微量离心抗凝管。所有血液标本采集后用经严格质控、性能稳定的Sysmex-1800i血液分析仪在1 h内进行检测。手工血小板计数按全国临床检验操作规程严格操作,对上述每份标本进行血小板手工计数,每份标本重复计数2次,取平均值。
1.3 统计学处理
数据以±标准差(x±s)表示,进行配对样本t检验,P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
见表1～3。
表1 不同红细胞的MCV标本血小板计数结果比较(x±s)
Tab.1 Comparison of different red blood cell MCV on platelet count
表2 血小板内在因素计数结果比较(x±s)
Tab.2 Results of platelet internal factors for platelet count
3 讨论
3.1 实验方法
红细胞MCV<70 fl,仪器法与手工法间差异有统计学意义(P<0.05),要进行人工血小板计数。Sysmex-1800i的血小板计数是采用电阻抗原理,红细胞和血小板的计数是在同一通道中进行,它们之间通过颗粒大小来加以识别。在正常情况下,血小板大小分布能清楚地与红细胞区分开来。从直方图来看,红细胞正常分布在50～200 fl范围内呈右偏态分布,而血小板则集中在2～15 fl范围内呈左偏态分布,在25～30 fl[3]处,曲线逐渐接近横坐标,但在某些情况下,如小红细胞、红细胞碎片增多(如地中海贫血、缺铁性贫血、严重烧伤等),血小板与红细胞测量的信号常有交叉,小红细胞或红细胞碎片的脉冲信号可能视为血小板信号造成实验误差,导致血小板计数的假性增高[3]。
3.2 血小板的内在因素
由表2可见,血小板直方图分布正常时,无论血小板计数值正常、减少还是增高,Sysmex-1800i检测结果与显微镜计数法差异无统计学意义。因此血小板直方图分布正常且无其他因素干扰时,不需要显微镜计数复查。
由表2可见,大血小板组Sysmex-1800i检测结果与显微镜计数法差异有统计学意义(P<0.05)。当被检标本有大血小板存在时,血小板直方图显示出分布峰右移,在35 fl处才接近横坐标,MPV明显增高,一般大于12 fl,同时MCV和红细胞体积分布宽度(RDW)正常,排除小红细胞干扰;涂片染色镜检可见较多的大血小板,当血小板体积大于25 fl时,这些大血小板被误认为是小红细胞而不纳入血小板计数范围,致使仪器法血小板计数结果偏低。因此标本中有大血小板存在时,需要显微镜计数及血片复查。
由表2可见,血小板聚集组Sysmex-1800i检测结果与显微镜计数法的差异有统计学意义(P<0.05)。被检标本中有血小板聚集时,血小板直方图分布峰左侧起点较高,这与正常血小板直方图有明显差别。同时MPV增高,MCV和RDW均正常可排除小红细胞干扰,涂片镜检可见5～15个聚集成团的血小板。检测结果间差异有统计学意义,仪器法检测结果偏低,这种情况多数是由于抽血不顺、抗凝不完全引起,个别EDTA依赖性血小板聚集也可引起,导致仪器计数血小板结果假性降低[5]。因此标本中有聚集血小板存在或与临床不相符[6]时,需要显微镜计数及血片复查。
3.3 采血原因
由表3a显示,如分析检测结果的影响均在可接受的范围之内时,不同采血方式及物理性状结于血细胞分析结果影响不大,差异无统计学意义。
由表3b显示,末梢血样本的血小板检测结果与临床不符时,重新采集静脉血检测结果与末梢血样本的血小板检测结果间差异有统计学意义。末梢血干扰因素[7]较多,由于穿刺部位、深度及挤压时组织液混入等因素的影响,或因血小板受挤压时组织液混入等因素的影响,或因血小板受挤压刺激而损耗,使其出现不同程度的聚集,导致结果假性降低。因此,对于末稍血血小板减少(<100×109/L)的病例,若临床上无出血症状,则要重采静脉血及手工血小板计数[8]。
总之,由于血小板易凝集、易破坏的特性和诸多影响,操作者在使用血细胞分析仪应注意排除干扰,为临床诊断、治疗提供正确的参考数据。
[参考文献]
[1]朱晓辉,何菊英,朱仲勇.应用血液分析仪后复查血片的内容和方法及程序[J].中华检验医学杂志,2003,26(12):785-787.
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[8]李瑾.影响静脉采血检验结果的因素与对策[J].中国误诊学杂志,2007, 7(8):102.
(收稿日期:2010-03-30)